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適應(yīng)無血清培養(yǎng)基
許多連續(xù)細(xì)胞系,如HeLa,CHO-K1或小鼠骨髓廇可能可以適應(yīng)于缺乏血清的生長環(huán)境.適應(yīng)過程常常是一個很長的選擇周期,此間只有細(xì)胞群體中的少數(shù)被選擇出來,因此在此選擇過程中確保細(xì)胞系的性質(zhì)不喪失是很重要的.如果是骨髓瘤細(xì)胞,其目的是用于制備雜交廇,而如果是CHO細(xì)胞則用于做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),因此用無血清培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)必須在融合和轉(zhuǎn)染之前進(jìn)行,使選擇過程中丟失特性的危險性降到低.
適應(yīng)無血清培養(yǎng)基通常要經(jīng)過幾次連續(xù)的傳代培養(yǎng),使血清濃度逐漸降低.一旦細(xì)胞在某一血清濃度條件下形成穩(wěn)定的增殖狀態(tài),就可用更低濃度的血清將細(xì)胞傳代培養(yǎng),直至穩(wěn)定的生長增殖再次形成,而后再次稀釋血清.如果是懸浮培養(yǎng),要計算活細(xì)胞的數(shù)量 ,根據(jù)活細(xì)胞的數(shù)量稀釋細(xì)胞懸液,此時需要保持的低細(xì)胞濃度要比正常傳代培養(yǎng)所需的細(xì)胞濃度高一些.對于單層細(xì)胞培養(yǎng),可在傳代培養(yǎng)的前幾天先降低培養(yǎng)基中的血清濃度,而后再用新的低濃度培養(yǎng)基進(jìn)行傳代培養(yǎng).在適應(yīng)過程中,可能有必要在培養(yǎng)基中添加一些已知的因子來代替血清.
