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β-興奮類快速檢測試劑盒說明書

點擊次數(shù)：1490 更新時間：2019-03-22

EF33B\J2 2016-01版

β-興奮類

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的β-興奮類藥物將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗β-興奮類藥抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含β-興奮類藥物的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應β-興奮類藥物的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度： 0.1ppb
孵育溫度： 25℃
孵育時間： 30min～15min
樣本檢測下限

豬尿 ·········································· 0.3ppb

豬肉 ·········································· 0.6ppb

交叉反應率

克倫特羅（Clenbuterol）························· 100%

西馬特羅（Cimaterol） ······················· <4%

溴布特羅（Brombuterol） ······················ 60%

馬布特羅（Mabuterol） ························· 108%

班布特羅（Bambuterol） ······················ <5%

氯丙那林（Clorprenaline） ····················· <1%

沙丁胺醇（Salbutamol） ························· 75%

特布他林（Terbutaline ） ······················ 25%

噴布特羅（Penbutolol） ························· 19%

妥布特羅（Tulobuterol） ························ 23%

菲諾特羅（Fenoterol） ····························<0.1%

萊克多巴胺（Ractopamine） ······················ <0.1%

樣本回收率

豬尿、豬肉 ···························· 90%±30%

三、試劑盒組成

1	微量測試孔	每條8孔，一板12條
2	標準液×6瓶（1ml/瓶）	0ppb	0.1ppb
		0.3ppb	0.9ppb
		2.7ppb	8.1ppb
3	酶標記物	7ml	紅色帽
4	抗體工作液	10ml	藍色帽
5	底物A液	7ml	白色帽
6	底物B液	7ml	黑色帽
7	終止液	7ml	黃色帽
8	20X濃縮洗滌液	40ml	白色帽
9	5X樣本提取液	50ml	透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器：酶標儀、離心機、恒溫箱、打印機

微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl

試劑：氫氧化鈉、濃鹽酸

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。

樣本前處理需配制：

配液1 0.2M 鹽酸

取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L。

配液2 1M 氫氧化鈉

稱取4g 氫氧化鈉固體加去離子水定溶至

100ml。

配液3 樣本提取液

5X樣本提取液用去離子水1：4稀釋。

樣本處理：

（a）豬肉樣本的處理方法

稱取 2 ± 0.05g 均質(zhì)后的組織于50ml離心管中，加入3ml 0.2M鹽酸（見配液1），充分振蕩3min。
再加入600ul 1M 氫氧化鈉（見配液2）溶液和2.4ml 樣本提取液（見配液3）溶液，充分振蕩3min，室溫4000r/min 以上離心10min。
取20 µl上層液體用于分析。（注：離心后若有脂肪層，去除脂肪層或撥開脂肪層，取清澈液體進行分析）。

樣本稀釋倍數(shù)： 4倍

（b）豬尿樣本的處理方法

取20µl清亮尿樣直接測定（如果尿樣渾濁一定

要過濾或4000r/min離心10min，直至得到清亮

尿樣），暫不使用的樣本應冷凍保存。

樣本稀釋倍數(shù): 1倍

六、酶標免疫分析程序:

測定前應須知：

使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟：

從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
配液：將 40ml濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去離子水按照 1：19 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
加標準品/樣本20µl/孔到各自的微孔中，加入酶標記物50µl/孔，然后加入80µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境反應30min。
將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液250µl/孔洗板4～5次，每次間隔15～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
顯色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
測定：加入終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，5min內(nèi)讀數(shù)），測定每孔OD值。

七、結果判定

結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含β-興奮量成負相關。

1、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.1ppb為1.816；0.3ppb為1.415；0.9ppb為0.74；2.7ppb為0.313；8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb～8.1ppb；樣本2的濃度范圍是0.3ppb～0.9ppb，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中β-興奮類藥物實際濃度。

2、定量分析

（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即