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免疫組化試劑盒使用說明書
保存方法：2-8℃保存。 有效期：一年。 生產(chǎn)日期：見封口。
工作原理：
辣根過氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不會遮蓋抗原的結(jié)合部位，具有較高活性及特異性，可溶性佳，生成的產(chǎn)物不擴散，可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強，易進入細胞內(nèi)。DAB在 H2O2存在的情況下，可以作為HRP的電子供體，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑。
試劑盒內(nèi)容：
| 名稱 | 規(guī)格 |
1 | 0.01mol/L pH6.0枸櫞酸鹽緩沖液 | 1L |
2 | PBS緩沖液 | 2L |
3 | 廣譜二抗 | 3mL |
4 | 30%H2O 2 | 10 mL |
5 | DAB顯色液I | 0.6mL |
6 | DAB顯色液II | 0.6mL |
自備試劑：無水乙醇、蘇木素。
操作步驟：
1. 60℃常規(guī)脫蠟至水后，將石蠟切片先后浸入二甲本苯Ⅰ，二甲本苯Ⅱ各10min。然后逐級降濃度酒精入水，每次3-5 min。
① | 無水灑精 | 3－5min |
② | 90% 酒精 | 3－5min |
③ | 85% 酒精 | 3－5min |
④ | 75% 酒精 | 3－5min |
⑤ | PBS洗滌3次 | 每次5 min |
4.滴加一抗： 滴加適當(dāng)稀釋的一抗到切片上，37℃孵育1小時左右或者4℃過夜， pH7.4的PBS洗滌3次，每次5 min 。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關(guān)系。一般來說，陽性染色強度不夠時，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間；背景過高時，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時間。）
