全血/組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑盒
Rapid Genomic DNA Kit
產(chǎn)品信息：
試劑盒組成 | 保存 | YDL110-01 100 次 | YDL110-02 200 次 |
RNaseA（10mg/ml） | 室溫 | 300μl×2 | 300μl×4 |
裂解液 TL | 室溫 | 25ml | 50ml |
緩沖液 BB | 室溫 | 50ml | 100ml |
結(jié)合液 CB | 室溫 | 30ml | 60ml |
抑制物去除液 IR | 室溫 | 50ml | 100ml |
|
| 25ml | 25ml×2 |
漂洗液 WB 室溫 第-次使用前按說明加指*#定量乙醇 | |||
洗脫緩沖液 EB | 室溫 | 15ml | 15ml ×2 |
蛋白酶 K（20mg/ml） | -20℃ | 1ml×2 | 1ml×4 |
吸附柱 AC | 室溫 | 100 個 | 200 個 |
收集管（2ml） | 室溫 | 100 個 | 200 個 |
保存條件：本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。RnaseA、蛋白酶 K
可室溫運輸，建議-20℃長期保存。
產(chǎn)品介紹：
*的結(jié)合液/蛋白酶 K 迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除， 后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點：
1.重復(fù)性好:離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2 提取純度高，OD260/OD280 典型的比值達(dá) 1.7～1.9，可直接用于 PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。
3. 簡單快速，一小時內(nèi)即可獲得超純的基因組 DNA
4. 廣 泛：適用于血液、多種動物細(xì)胞和動物組織等。
注意事項：
1. 結(jié)合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。
3. 結(jié)合液 CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 洗脫液 EB 不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保批pH 大于7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA 應(yīng)該保存在-20℃。DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時可以適當(dāng)稀釋。
自備試劑：無水乙醇
操作步驟：
提示：第-次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指#*定量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
1. 處理材料
a. 血液
如提取材料為血液，可直接使用220μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足
220µl用緩沖液BB補足220µl，振蕩混勻。
注意：如需處理更大體積血液，如300μl-1ml，應(yīng)按以下步驟操作：在樣品中加入 3 倍體積紅細(xì)胞裂解液 （例如，300μl血液加入900μl紅細(xì)胞裂解液），顛倒混勻， 室溫放置5 min，期間再顛倒混勻幾次。10000rpm離心1 min（若離心 機*#高轉(zhuǎn)速不允許，也可3000rpm離心5 min，吸去上清，留下白細(xì)胞沉 淀，加220μl緩沖液BB， 振蕩至*混勻。 紅細(xì)胞裂解液本公司另外有售，可根據(jù)需要來決定購買。
b. 
如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的抗凝血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量 5-20μl，可加緩沖液 BB 補足 220μl 后進(jìn)行下面的裂解步驟。
c. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液，然后 10,000rpm 離心 1 min，棄上清，加 220μl
緩沖液BB，振蕩至*懸?。?/font>
d. 動物組織（脾組織用量應(yīng)少 10mg）應(yīng)先打碎處理為細(xì)胞懸液，然后 10,000rpm
離心 1 min，倒盡上清，加 220μl 緩沖液 BB，振蕩至*懸浮。
2. 提取組織培養(yǎng)細(xì)胞和動物組織DNA時為清除RNA，加入5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻，室溫放置5 min。
3. 加入20µl蛋白酶K，振蕩混勻，置于55℃水浴中消化處理。
a. 提取血液基因組時，只需加入Proteinase K混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。
b. 提取細(xì)胞基因組時，只需加入Proteinase K混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。
c. 提取組織基因組時，加入Proteinase K混勻后，在56℃放置，直至組織溶解，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進(jìn)行下一步驟。
注意：不同組織裂解時間不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化過夜）。不會影響 后續(xù)操作。每小時顛倒混合樣品2-3次，用水浴振蕩器也可
- 加入結(jié)合液CB并充分混勻后，置于70℃水浴10 min，等溶液變清亮，12,000rpm短離心以去 除管蓋內(nèi)壁的水珠。
注意：加入緩沖液GB時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不*，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA 不純。當(dāng)血液體積≤200μl且沒有采用紅細(xì)胞裂解處理，或是樣本儲存條件不佳，水浴后顏 色可能為深褐色，注意溶液中沒有團(tuán)塊等沉淀
- 加入220µl的無水乙醇，充分振蕩混勻15 sec，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去 除管蓋內(nèi)壁的水珠。
- 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中），
12,000rpm 離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱AC放回收集管中。
- 加入500µl抑制物去除劑IR，12,000rpm離心1 min。倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。
- 加入500µl 漂洗液WB，12,000rpm離心30 sec。（使用前請檢查是否已經(jīng)加入無水乙醇）倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回
收集管中。
10. 重復(fù)步驟9的操作。
11. 將吸附柱AC柱放回收集管中，12,000rpm離心2 min，倒掉廢液。將AC吸附置于室溫放置數(shù)分鐘，以*晾干吸附材料中殘
余的漂洗液。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實驗。
- 在吸附膜的中間部位加 500-100μl 洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置 2-5 min，12,000 rpm 離心 1 min。為了提高基因組 DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置 2-5 min，12,000rpm 離心 1 min。
(注意: DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA 降解)
實驗代做服務(wù)：
|
執(zhí)照.jpg)
