本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
牛（Bovine）血吸蟲病（Schistosoma）
ELISA 檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被血吸蟲病抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中血吸蟲?。⊿chistosoma）的存在與否。
樣品收集、處理及保存方法
1.
血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.
血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3.
細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.
組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。
5.
保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.
酶標(biāo)儀（450nm）
2.
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.
37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的Z佳檢測效果。
4.
嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.
所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成：
名稱 | 96 孔配置 | 96 孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無 |
陰性對照 | 0.5mL | 0.5mL | 0.5mL |
陽性對照 | 0.5mL | 0.5mL | 無 |
檢測抗原-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
底物 A | 6mL | 3mL | 無 |
底物 B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無 |
說明書 | 1 份 | 1 份 | 無 |
自封袋 | 1 個 | 1 個 | 無 |
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自動洗板機(jī)：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各 50μL；
3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；
4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）
標(biāo)記的檢測抗原 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.
每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7.
每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結(jié)果判斷
1.
試驗有效性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15。
2.
臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
3.
陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cutoff），樣品為陰性
4.
陽性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cutoff），樣品為陽性
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15，說明試驗結(jié)果有效。
2.
特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3.
重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。
4.
貯藏：2-8℃，避光防潮保存。5. 有效期：6 個月
免責(zé)聲明
1.
試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2.
嚴(yán)格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。
執(zhí)照.jpg)
