| 更新時(shí)間： | 2025-01-02 |
| 型 號(hào)： | |
| 所屬分類： | 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) |
| 報(bào) 價(jià)： | 2000 |
提供商: 上海研謹(jǐn)生物服務(wù)名稱: 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)服務(wù)規(guī)格: 實(shí)驗(yàn)服務(wù) 價(jià)格： 2000元周期： 4-6周收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:歡迎咨詢?cè)斦?，我們?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請(qǐng)瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詳詢!
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)意義
1.可廣泛引用與miRNA的靶基因檢測(cè)，可以判斷miRNA是否與靶基因結(jié)合，也可以定量反映miRNA對(duì)目的基因的抑制作用。
2.轉(zhuǎn)錄因子(反式作用因子)存在DNA結(jié)合域，可以與靶標(biāo)啟動(dòng)子中的特異序列(順式作用元件)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合，從而調(diào)控基因的表達(dá)，雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)是檢測(cè)這類轉(zhuǎn)錄因子與基因特異序列的重要手段，是真核基因表達(dá)調(diào)控研究的常用方法。
實(shí)驗(yàn)原理及流程
雙熒光素酶是指螢火熒光素酶和海腎熒光素酶，螢火蟲熒光素酶呈黃綠色，波長(zhǎng)550-570nm, 海腎熒光素酶呈藍(lán)色，波長(zhǎng)為480nm。報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)是將靶標(biāo)啟動(dòng)子的特定片段插入熒光素酶表達(dá)序列的前方，構(gòu)建帶有靶標(biāo)啟動(dòng)子片段的雙報(bào)道基因質(zhì)粒，然后將待測(cè)的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒與報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞或者其他相關(guān)細(xì)胞系，如果轉(zhuǎn)錄因子能夠激活
啟動(dòng)子，則報(bào)告基因表達(dá)，熒光素酶的表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子作用強(qiáng)度成正比。加入熒光素酶底物即可根據(jù)熒光強(qiáng)度檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子與靶啟動(dòng)子之間是否存在相互作用。熒光素酶報(bào)告基因可構(gòu)建在同一質(zhì)?；蛘邩?gòu)建為兩個(gè)質(zhì)粒，即轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒與靶啟動(dòng)子片段質(zhì)粒。
實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
實(shí)驗(yàn)周期: 4-6周
交付標(biāo)準(zhǔn): 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)、鑒定結(jié)果報(bào)告、分析報(bào)告、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(試劑、 耗材.實(shí)驗(yàn)步驟)、原始數(shù)據(jù)等
需確認(rèn)的信息
1.基因與啟動(dòng)子信息
2.具體分許信息.
3.是否提供質(zhì)粒?
參考文獻(xiàn)
[1] Miraglia E , Nylen, Frank, Johansson K，et al. Entinostat up-regulates the CAMP gene encoding LL-37 via activation
of STAT3 and HIF-1a transcription factors[J]. Scientific Reports, 2016, 6:33274.
[2] Azimzadeh P，Olson J A，Balenga N . Reporter gene assays for investigating GPCR signaling.[J]. Methods Cell Biol,
2017:89-99.
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